Investigadores de la Facultad de Odontología de la Universidad de Nueva York NYU Dentistry, en colaboración con Rheonix, Inc. Ithaca, NY, están desarrollando una nueva prueba para el virus del Zika que utiliza saliva para identificar marcadores de diagnóstico del virus en una fracción deEl tiempo de las pruebas comerciales actuales.
La prueba, que fue adaptada de un modelo existente desarrollado por NYU y Rheonix para pruebas rápidas de VIH, se describe en dos nuevas publicaciones que aparecen en PLOS UNO y el Diario de experimentos visualizados JOVE.
Cómo se prueba el Zika
Los brotes de enfermedades infecciosas están ocurriendo con frecuencia creciente gracias a factores como la concentración de la población y los viajes aéreos mundiales. Un brote de 2015 del virus del Zika en Brasil se propagó a otros países de América Central y del Sur, el Caribe y el sur de los Estados Unidos,llevando a la Organización Mundial de la Salud a declarar que el Zika y su vínculo con defectos congénitos son una emergencia de salud pública.
"El reciente brote del virus del Zika confirma que necesitamos un programa eficaz de vigilancia y diagnóstico para reducir el impacto de futuras enfermedades infecciosas emergentes", dijo Maite Sabalza, PhD, asociada postdoctoral en el Departamento de Ciencias Básicas y Biología Craneofacial de NYU Dentistryy el autor principal de los estudios en PLOS UNO y JoVE.
La identificación temprana de patógenos es crítica para combatir la propagación de enfermedades infecciosas. Las pruebas a menudo implican dos pasos separados: uno para detectar los ácidos nucleicos de un patógeno ARN o ADN y otro para detectar anticuerpos, las proteínas que el cuerpo produce en respuesta a los patógenos.
Las muestras de sangre se usan con mayor frecuencia para detectar el virus del Zika y generalmente se procesan usando una técnica de diagnóstico común llamada reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real RT-PCR. Pero la sangre puede no ser el mejor líquido: mientras el virus desaparece en ella sangre, una o dos semanas después de que una persona se infecta, puede persistir más tiempo en la saliva, el semen y la orina. Además, los anticuerpos pueden permanecer durante meses o años en esos fluidos corporales, por lo que es esencial para el diagnóstico detectar también anticuerposdespués de la infección
Respaldados por fondos de los Institutos Nacionales de Salud, los investigadores de NYU Dentistry están desarrollando una prueba rápida de Zika que combina ensayos de ácido nucleico y anticuerpos usando saliva, dado que el virus Zika y los anticuerpos persisten en la saliva. Una prueba de saliva también es no invasiva, tiene un costoeficaz y más fácil de recolectar que la sangre o la orina.
Resultados más rápidos
La nueva prueba también tiene el potencial de producir resultados en cuestión de minutos en lugar de horas o días. Las pruebas actuales de RT-PCR toman alrededor de tres horas y las pruebas específicas de anticuerpos pueden tomar varias semanas. Los investigadores de la NYU están utilizando un método diferente llamado isotérmicoamplificación, que puede detectar los ácidos nucleicos de un virus en tan solo 20 minutos, y pruebas de anticuerpos que pueden tomar menos de una hora con antígenos específicos del Zika.
"Cuanto antes pueda identificar un patógeno, antes se pueden tomar medidas para tratar y aislar a las personas. Durante una epidemia, puede evaluar a las personas antes de que suban a un avión. El futuro de pasar por la seguridad en el aeropuerto puede no serquitándose los zapatos, pero escupiendo en un tubo ", dijo el autor del estudio Daniel Malamud, PhD, profesor de ciencias básicas en NYU Dentistry.
Del VIH al Zika
El equipo de investigación se basa en su trabajo de colaboración anterior con Rheonix para desarrollar una prueba rápida de saliva para el VIH que puede detectar tanto el ARN viral como los anticuerpos.
"Cuando desarrollamos la prueba de VIH, sabíamos que podíamos usar el mismo modelo para cualquier enfermedad infecciosa. Todo lo que necesitamos saber es la secuencia de ácido nucleico y un antígeno para identificar anticuerpos específicos", dijo Malamud.
adentro PLOS UNO , los investigadores describen cómo alteraron este modelo para usar marcadores que detectan secuencias de ácido nucleico del Zika en lugar de las del VIH. Luego usaron un dispositivo portátil de amplificación isotérmica, que podría usarse para pruebas de punto de atención, paraidentificar el ARN del Zika
Después de demostrar que la prueba podía confirmar la presencia del virus usando tanto ARN de Zika purificado como saliva infectada con Zika, adaptaron la prueba al cartucho Rheonix CARD® y a la estación de trabajo, permitiéndoles estimar la carga viral en muestras de saliva.la cantidad de virus presente es útil para comprender la gravedad de la enfermedad y las respuestas inmunes, particularmente entre las mujeres embarazadas y los fetos.
Los investigadores también identificaron antígenos específicos de Zika, que pueden usarse para detectar los anticuerpos específicos de Zika necesarios para las pruebas, utilizando un microarray de péptidos de alta densidad que describen en JoVE. Debido a que el Zika puede confundirse fácilmente con otros virus como el denguey Chikungunya, la identificación de antígenos específicos del Zika allana el camino para pruebas de diagnóstico más precisas.
Con evidencia que muestra que tanto las pruebas de ácido nucleico como de anticuerpos funcionan, los investigadores pueden combinarlas en el cartucho Rheonix CARD® para procesar ambos ensayos de diagnóstico de forma automática y simultánea. Los investigadores de NYU y de todo el mundo continúan validando sus hallazgos en másexperimentos con saliva infectada con Zika.
"Al trabajar hacia el objetivo de hacer que los diagnósticos efectivos estén disponibles rápidamente, hemos desarrollado un protocolo genérico que no solo se puede usar para evaluar el virus del Zika, sino que se puede adaptar para la próxima enfermedad infecciosa emergente o reemergente", dijo SabalzaEl autor del estudio, Richard Montagna, PhD, FACB, Vicepresidente Senior de Asuntos Científicos y Clínicos de Rheonix, agregó: "Además de poder reaccionar muy rápidamente ante cualquier enfermedad infecciosa emergente o reemergente, nuestra plataforma de pruebas totalmente automatizada requiere prácticamentesin esfuerzos prácticos y es muy adecuado para su uso por personas con capacitación mínima ".
Además de Sabalza, Malamud y Montagna, autores del estudio sobre el PLOS UNO el artículo incluye Cheryl A. Barber, Talita Castro y William R. Abrams de NYU Dentistry y Rubina Yasmin, Beum Jun Kim y Hui Zhu de Rheonix, Inc. Barber y Abrams de NYU fueron coautores del artículo de JoVE.
La investigación fue apoyada por el Instituto Nacional de Investigación Dental y Craneofacial NIDCR de los Institutos Nacionales de Salud R44DE024456 y 3R44DE024456-03S1. El apoyo también fue brindado por una subvención administrativa complementaria de Small Business Innovation Research de NIDCR R44 DE024456 queevolucionó a partir de la subvención de NIDCR U01 DE017855 para el desarrollo de un diagnóstico confirmatorio de VIH en el punto de atención.
Fuente de la historia :
Materiales proporcionado por Universidad de Nueva York . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
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