Se ha descubierto que una cepa de ratones endogámicos de uso común para la creación de los llamados animales knockout transporta una mutación previamente no detectada que podría afectar los resultados de los estudios de investigación del sistema inmunitario. En un documento que recibe una publicación en línea en Informes de celda , un equipo con sede en el Instituto Ragon de MGH, MIT y Harvard describe el hallazgo de una mutación del cromosoma 11 en una cepa de C57BL / 6, a menudo llamados ratones "6 negros" o B6, que rastrearon hasta un comercial específicoproveedor. Sus hallazgos sugieren que los resultados de estudios previos usando esta sublínea de C57BL / 6 necesitan ser revisados de nuevo para asegurarse de que esta mutación recientemente identificada no sea responsable de los resultados observados.
"Encontramos mutaciones inesperadas con consecuencias potencialmente importantes en cepas de ratones que habían sido diseñadas por separado en laboratorios de California y Japón, y después de un trabajo de detective detallado, rastreamos el problema hasta una sublínea de ratones B6 de una compañía específica quese han vendido en Asia, Norteamérica, Europa e Israel ", dice Shiv Pillai, MD, PhD, miembro del Instituto Ragon y director del programa del Centro de Excelencia Autoinmune en el Hospital General de Massachusetts." Hemos notificado a esta empresa:Harlan Laboratories, que ahora es parte de Envigo, de nuestros hallazgos, y han sido muy receptivos y utilizarán los enfoques que hemos proporcionado para verificar todas sus colonias ".
Las cepas de ratón endogámicas individuales utilizadas para la investigación difieren entre sí en muchos sitios genéticos, lo que puede dar lugar a diferencias en sus respuestas inmunes. En estudios inmunológicos realizados en todo el mundo, los ratones mutantes son "retrocruzados" durante muchas generaciones en ratones B6 para quetodos los genes que no sean el gen mutante se derivan de la cepa B6. Esto permite la comparación de datos de laboratorios en diferentes partes del mundo y simplifica la creación de ratones con mutaciones en varios genes.
Un estudio realizado en 2009 en el laboratorio de Pillai descubrió que dos cepas de ratones modificadas genéticamente para carecer de los genes Siae o Cmah, que codifican enzimas involucradas con una familia de proteínas llamadas ácidos siálicos, también tenían defectos significativos en el desarrollode células B, que se suponía que eran el resultado de los genes knockout. Pero cuando los ratones deficientes en Siae se retrocruzaron con un grupo diferente de ratones C57BL / 6, el resultado fue una cepa de ratones knockout Siae que no tenían elDefectos en el desarrollo de células B. También se descubrió que una cepa de ratones recientemente diseñada con una mutación diferente de Siae tenía un desarrollo normal de células B.
La secuenciación genética detallada de la primera línea knockout identificó una mutación previamente insospechada en un gen llamado Dock2, ubicado en un cromosoma 11 en lugar de la cromosona 9 donde se encuentra Siae. La misma mutación se había informado previamente en dos colonias de un ratón knockout diferenteEl equipo de Pillai también encontró la mutación Dock2 en un grupo completamente diferente de ratones de la Universidad de California, San Diego, donde se había desarrollado su cepa mutante Siae, y se dio cuenta de que tres cepas de ingeniería diferentes con la misma no deseadala mutación probablemente la había adquirido de una fuente común, eventualmente remontada a una sublínea de ratones C57BL / 6 de Harlan / Envigo.
Dado que la mayoría de los trabajos de investigación que usan ratones C57BL / 6 u otras cepas de "antecedentes" no indican la sublínea específica, de la cual hay muchos, los investigadores del Instituto Ragon no tienen forma de saber cuántos estudios podrían verse afectados por sus hallazgos.Pero esperan que la publicación de estos resultados alertará a otros equipos de investigación sobre la posible necesidad de revisar sus resultados. Varios laboratorios comerciales han instituido medidas para prevenir la aparición de mutaciones aleatorias en cepas de ratones endogámicos, y las notas de Pillai, todos los vendedores comerciales deben establecer talesprogramas.
"Si bien las células madre embrionarias de ratones C57BL / 6 han estado disponibles recientemente, lo que permite la generación de cepas knockout con menos retrocruzamiento, los ratones B6 se usan para muchos tipos diferentes de experimentos, incluso como controles", dice Pillai, quien es unprofesor de Medicina y de Ciencias y Tecnología de la Salud en la Facultad de Medicina de Harvard. "Los investigadores que los han utilizado necesitan volver a genotipar a los ratones para buscar la mutación Dock2 y, si la encuentran, verificar si sus resultados se conservan siLa mutación Dock2 se produce ".
Fuente de la historia :
Materiales proporcionados por Hospital General de Massachusetts . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
Referencia del diario :
Cite esta página :