Un grupo de investigadores dirigido por Tomoji Mashimo, Profesor Asociado, Instituto de Ciencias Animales Experimentales, Escuela de Graduados de Medicina, Universidad de Osaka y Kazuto Yoshitomi, Profesor Asistente, Laboratorio de Recursos de Genómica del Ratón, Instituto Nacional de Genética, Organización de Investigación de Información y Sistemasdesarrollaron dos nuevos métodos de modificación génica: lsODN oligodesoxinucleótido largo monocatenario y 2H2OP dos hits dos oligo con plásmido. Estos métodos utilizan CRISPR repeticiones agrupadas de cortocircuito interespaciadas agrupadas regularmente -Cas y ssODN oligodesoxinucleótido monocatenario.
Los sistemas CRISPR-Cas han facilitado la modificación génica en ratones y ratas. Al introducir el ARN mensajero CasR y el ARNg, el ARNg reconoce el ADN objetivo y Cas9 corta el sitio objetivo. Las roturas del ADN se reparan mediante la unión del extremo no homólogo, lo que provoca mutaciones en el ADN, lo que resulta en la eliminación de genes.
Del mismo modo, cuando se introduce ssODN con Cas9-gRNA, las roturas de ADN se reparan mediante reparación dirigida por homología usando ADN de donante, lo que da como resultado la secuencia de ADN con una a docenas de bases pb. Sin embargo, ssODN permitió la síntesisde oligos de hasta 200 pb, por lo tanto, lo que dificultaba eliminar secuencias de ADN grandes como GFP proteína fluorescente verde.
Con estos dos métodos de modificación génica, este grupo logró lograr un efecto eficaz y preciso de genes GFP, la introducción de grandes regiones genómicas aproximadamente 200kbp, que era convencionalmente imposible, así como la sustitución de genes de ratas por humanosgenes derivados, o generando animales humanizados genéticos.
Estos dos métodos knock-in aumentarán la eficiencia de la ingeniería genética en ratones y ratas, así como en otras diversas especies de organismos, y se convertirán en técnicas muy útiles para producir nuevos organismos genéticamente modificados. Es muy esperado que estos genéticamente modificadoslos organismos se utilizarán en un amplio campo de estudios, como el desarrollo de fármacos, la investigación traslacional y la medicina regenerativa.
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Materiales proporcionado por Universidad de Osaka . Nota: El contenido puede ser editado por estilo y longitud.
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